截短猪流行性腹泻病毒N蛋白的可溶性表达及其抗原活性

doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2014.09.026

畜牧兽医学报 ›› 2014, Vol. 45 ›› Issue (9): 1561-1566.doi: 10.11843/j.issn.0366-6964.2014.09.026

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截短猪流行性腹泻病毒N蛋白的可溶性表达及其抗原活性

朱卫霞¹，袁万哲¹，李丽敏¹，宋勤叶^1*，孙泰然²，李潭清¹

（1.河北农业大学动物医学院河北省兽用生物制品工程技术研究中心，保定 071000；2.保定市动物疫病预防控制中心，保定 071001）

收稿日期:2014-03-03 出版日期:2014-09-23 发布日期:2014-09-23
通讯作者: （1.河北农业大学动物医学院河北省兽用生物制品工程技术研究中心，保定 071000；2.保定市动物疫病预防控制中心，保定 071001）
作者简介:朱卫霞（1988-），女，河北石家庄人，硕士生，主要从事动物传染病学与新型生物制品学研究，E-mail：wazhuweixia@126.com
基金资助:
国家自然科学基金项目（31372441）；河北省科技计划项目（13226603D-1<2013>- X）

Prokaryotic Soluble Expression of Trunked N Protein of Porcine Epidemic Diarrhea Virus and Its Antigenic Activity

ZHU Wei-xia¹，YUAN Wan-zhe¹，LI Li-min¹，SONG Qin-ye^1*，SUN Tai-ran²，LI Tan-qing¹

(1.Hebei Province Research Center of Veterinary Biologicals engineering and technology，College of Veterinary Medicine，Agricultural University of Hebei，Baoding 071000，China；2.The Center for Animal Disease Control and Prevention，Baoding 071001，China)

Received:2014-03-03 Online:2014-09-23 Published:2014-09-23

摘要/Abstract

摘要：

应用原核表达系统表达猪流行性腹泻病毒（PEDV）N蛋白，并探讨其抗原活性。通过RT-PCR扩增截短的PEDV N蛋白（truncated N protein，tN蛋白）基因；构建包含tN蛋白基因的原核表达质粒（pET32a-PEDV-tN），将质粒转化E.coli BL21感受态细胞，诱导表达目的蛋白；通过SDS-PAGE和Western blotting鉴定重组tN蛋白的表达及其免疫反应原性；用提纯的tN蛋白皮下接种BLAB/c小鼠，通过ELISA和免疫过氧化物酶单层试验（IPMA）检测重组tN蛋白的免疫原性。结果应用RT-PCR扩增到了预期705 bp的tN蛋白基因；在E.coli BL21内，携带tN蛋白基因的重组质粒能够以可溶性表达形式诱导表达重组tN蛋白；该蛋白在体外可以与猪抗PEDV抗体特异性结合，能够诱导小鼠产生特异性抗体。本研究应用原核表达系统实现了截短猪流行性腹泻病毒（PEDV）N蛋白的可溶性表达，该蛋白具有良好的完全抗原活性。

Abstract:

To express the porcine epidemic diarrhea virus (PEDV) N protein by prokaryotic expression system and to identify its antigenicity，truncated N protein (tN) genes were amplified by RT-PCR and recombinant prokaryotic expression plasmid (pET32a-PEDV-tN) with tN protein gene was constructed.After the recombinant plasmids had been transferred into competent cells of E.coli BL21 and the bacteria had been inducted by IPTG，the expression and immunoreactivity of tN protein were detected respectively by SDS-PAGE and Western blotting.Then，BLAB/c mice were subcutaneously immunized with purified tN protein and the protein immunogenicity was detected by ELSIA and Immunoperoxidase monolayer assay.The tN protein genes of 705 bp were amplified and the recombinant plasmids carrying this gene could solubly express recombinant tN protein under induction of IPTG in E.coli BL21.The protein displayed specific binding to swine anti-PEDV antibody and induced mice to produce anti-PEDV antibody.These results showed that the soluble expression of PEDV tN protein with favorable complete antigenic activities was implemented by prokaryotic expression system.

中图分类号:

S852.659.6

朱卫霞，袁万哲，李丽敏，宋勤叶，孙泰然，李潭清. 截短猪流行性腹泻病毒N蛋白的可溶性表达及其抗原活性[J]. 畜牧兽医学报, 2014, 45(9): 1561-1566.

ZHU Wei-xia，YUAN Wan-zhe，LI Li-min，SONG Qin-ye，SUN Tai-ran，LI Tan-qing. Prokaryotic Soluble Expression of Trunked N Protein of Porcine Epidemic Diarrhea Virus and Its Antigenic Activity[J]. ACTA VETERINARIA ET ZOOTECHNICA SINICA, 2014, 45(9): 1561-1566.

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